Medio de cultivo sobre un soporte plástico (Dip-Slide), para la búsqueda de hemófilos, lactobacilos, Gardnerella vaginalis y Neisserias patógenas . Los resultados, obtenidos se pueden emplear como ayuda para el diagnóstico de las infecciones vaginales CONTENIDO10 sistemas de cultivo listos para el uso (dip-slide) y 10 pastillas para la generación de CO2.CONFIGURACIÓNChocolate Agar (marrón).Rogosa Agar (ámbar).Thayer Martin Agar (marrón) . VAGITEST inoculado con el material clínico (secreción vaginal, secreción uretral u otro), consiente la búsqueda de hemófilos, lactobacilos, Garnerella vaginalis y neisserias patógenas.Chocolate Agar es un medio enriquecido con sangre defibrinada, cocido, de caballo, y VITALEX growth SUPPLEMENT, mezcla que contiene vitaminas cofactores, aminoácidos y carbohidratos, necesarios para el aislamiento de hemófilos patógenos, de Gardnerella vaginalis, de neisserias patógenas y de otros microorganismos exigentes.El medio Thayer Martin Agar, mantiene las de medio rico del Chocolate Agar, pero el suplemento VCAT hace que se vuelva medio selectivo para el aislamiento de las neisserias patógenas de muestras clínicas . El suplemento VCAT es una mezcla de antibióticos: Vancomicina y Colistina que inhiben el crecimiento de los contaminantes Grampositivos y Gramnegativos, el antimicótico Anfotericina impide el crecimiento de hongos mientras que el Trimetoprim bloquea el crecimiento y la enjambrazón de los proteos.Rogosa Agar es un medio selectivo para el aislamiento de lactobacilos de procedencia oral, vaginal y fecal . La selectividad es dada por un bajo valor de pH y por la alta concentración de acetatos que obstaculizan el crecimiento de otras bacterias, favoreciendo así el desarrollo de los lactobacilos.FORMULACIÓN TÍPICA DE LOS MEDIOS EMPLEADOS EN VAGITEST (GRAMOS/LITRO)CHOCOLATE AGARPeptona 15.0Almidón 1.0Potasio Fosfato Bibásico 4.0Potasio Fosfato Monobásico 1.0Sodio Cloruro 5.0Sangre Defibrinado de Caballo 50.0 mlVitalex Growth Supplement 10.0 mlAgar 17.0pH 7.2 ± 0.2ROGOSA AGARTriptosa 10.0Extracto de Levadura 5.0Glucosa 10.0Arabinosa 5.0Sacarosa 5.0Sodio Acetato 15.0Amonio Citrato 2.0Potasio Fosfato Monobásico 6.0Magnesio Sulfato 0.57Manganeso Sulfato 0.12Hierro Sulfato 0.03Agar 15.0Tween 80 1.0 mlpH 5.4 ± 0.2THAYER MARTIN AGARPeptona 15.0Almidón 1.0Potasio Fosfato Bibásico 4.0Potasio Fosfato Monobásico 1.0Sodio Cloruro 5.0Sangre Defibrinado de Caballo 50.0 mlVitalex Growth Supplement 10.0 mlVancomicina 0.002Colistina 0.0075Anfotericina 0.001Trimetoprim 0.003Agar 15.0pH 7.2 ± 0.2RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRASObtener la secreción vaginal con dos tampones en fibra sintética, uno para efectuar la coloración de Gram, el otro para el aislamiento microbiano . Para la toma y la conservación de las muestras para la búsqueda del gonococo, se aconseja el medio de transporte AMIES . Las muestras para la búsqueda de los meningococos no se tienen que conservar, sino enviar directamente al laboratorio . DEL TESTSacar un dip-slide del frigorífico y dejarlo por unos 5 minutos a temperatura ambiente.Identificar la muestra con etiqueta adhesiva o escribiendo los datos directamente en el contenedor del dip-slide.Desenroscar y extraer el slide del contenedor cilíndrico sin tocar las superficies de los medio de cultivo.Teniendo el slide por el tapón, sembrar directamente las superficies de los medios de cultivo con el material clínico (secreción vaginal, secreción uretral u otro) obtenido con un idóneo tampón de recolección.Introducir en el vaso del slide una pastilla de CO2, mojada con una gota de agua estéril.Volver a introducir el slide en el contenedor y volver a cerrar enroscando.Incubar en un termostato regulado a 36 ± 1°C por 24-48 horas.INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSDespués de la incubación la presencia de bacterias es evidenciada por la aparición de colonias en las superficies de los medios de cultivo . Los medios de cultivo se emplean para estimar la calidad y la cantidad de los diferentes géneros microbianos que sostienen la infección o que constituyen la flora normal de la vagina como los lactobacilos.Los hemófilos crecen en Chocolate Agar con colonias grisáceas, semimates.El gonococo crece en Chocolate Agar y en Thayer Martin Agar con colonias de diámetro 0.5-1 mm de color blanco o grises, mates y elevadas . Colonias presuntas de gonococo han de identificarse mediante coloración de Gram, test de la oxidasis y fermentación de los azúcares.Las colonias de los meningococos son más grandes que las de los gonococos, de forma redonda y convexa.Gardenerella vaginalis crece en Chocolate Agar con colonias grisáceas semimates.Los lactobacilos crecen en Rogosa Agar con colonias blanco-gris con márgenes regulares, pueden ser tanto aplastadas como elevadas, lisas o arrugados . No todos los lactobacilos crecen en este medio.CONTROL CALIDADPara el control calidad del VAGITEST, los dip-slide son inoculados con las cepas microbianas indicadas en la siguiente tabla.Dimensión de la inoculación para productividad: 10-100 UFC/ml.Dimensión de la inoculación para selectividad: 104-105 UFC/ml.Dimensión de la inoculación para especificidad: 104 UFC/ml.Condiciones de incubación: 24-48 h a 36±1°C, en atmósfera enriquecida con CO2 (pastillas presentes en el estuche).Los resultados se interpretan como se describe en la siguiente tabla . Además se controla el aspecto de los medios.Cepas microbianas utilizados y resultados esperados en el control calidad:MicroorganismosCHOCOLATE AGARROGOSA AGARTHAYER MARTIN AGAREscherichia coli ATCC 25922crecimientocrecimiento inhibidocrecimiento inhibidoEnterococcus faecalis ATCC 19433crecimientocrecimiento inhibidocrecimiento inhibidoStaphylococcus aureus ATCC 25923crecimientocrecimiento inhibidocrecimiento inhibidoGardnerella vaginalis ATCC 14018crecimientocrecimiento inhibidocrecimiento inhibidoNeisseria gonorrhoeae ATCC 43069crecimientocrecimiento inhibidocrecimientoLactobacillus casei ATCC 393crecimiento inhibidocrecimientocrecimiento inhibidoLÍMITES Y ADVERTENCIASPara el material clínico por de extracción no utilizar tampones de algodón, sino de fibra sintética.Todas las colonias sospechosas cultivadas en los medios del VAGITEST han de ser sometidas a identificación.En el medio Thayer Martin Agar también crece N . lactamica . Se ha obtenido que el 3-10% de los gonococos (normalmente cepas AHU) son sensibles a la vancomicina y no crecen en Thayer Martin Agar (Mirrett et al., 1981) . Estas cepas se pueden recuperar en agar chocolate.Incubaciones prolongadas (más de 24 horas) pueden dar lugar a un crecimiento excesivo de la flora bacteriana concomitante en el medio Thayer Martin Agar que puede camuflar el crecimiento del gonococo.No utilizar las pastillas para la generación de CO2 si están rotas, húmedas o si el estuche no está íntegro.PRECAUCIONESLos medios aquí descritos no están clasificados como peligrosos según la legislación vigente ni contienen sustancias nocivas en concentraciones 1%, por lo tanto no requieren la disponibilidad de la Ficha de Seguridad.Los VAGITEST son un dispositivo desechable a utilizar exclusivamente para uso diagnóstico in vitro, están destinados a un ámbito profesional y tiene que ser usado en laboratorio por operadores adecuadamente formados, con métodos aprobados de asepsia y seguridad con respecto a los agentes patógenos.CONSERVACIÓNConservar a 2-8°C en sus estuches originales.Evitar conservar cerca de fuentes de calor y evitar excesivas variaciones de temperatura.En estas condiciones los productos descritos aquí son válidos hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta . No utilizar después de esta fecha.Eliminar si hay signos de deterioro antes del uso (vistosos cambios de color de los medios, deshidratación o separación de los medios del soporte, presencia de colonias bacterianas u hongos).NO CONGELAR.ELIMINACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADODespués de la VAGITEST y el material que ha entrado en contacto con la muestra en examen tienen que ser descontaminados y eliminados de acuerdo con las en uso en laboratorio para la descontaminación y la eliminación de material potencialmente infeccioso.
